Динамика показателей активности МОС

Динамика показателей активности МОС, NO-системы, СРО и АОС в микросомах СОЖ после ваготомии у животных с ульцерогенезом

Проведенные исследование показатели, что на 10 сут. после ваготомии у животных с ульцерогенезом содержание цитохрома Р-450 и в₅ практически не отличается от таковых значений у животных с ульцерогенезом без ваготомии. В то же время активность микросомальных ферментов на этот срок исследования у животных с ваготомией были существенно угнетены. Так, активность НАДФН — цит.С-ред. была ниже исходного — на 34,6% (Р<0,001) АГ — на 41,7% (Р<0,001), N-АП — на 22,9% (Р<0,001), Г-6-Фаза — на 22,2% (Р<0,02).

Та же тенденция сохраняется и после 20-ти суток ваготомии. Содержание цитохрома Р-450 в микросомах СОЖ остается без значительных изменений в группе животных с ваготомией по сравнению с исходом, а содержание в₅ даже снизилось — на 15,4% (Р<0,05). Уровень активности НАДФН-цит.С-ред. в группе животных с ваготомией по сравнению с исходом было снижено — на 23,5% (Р<0,02), АГ- на 52,6% (Р<0,001), N-АП — на 36,8% (Р<0,001), Г-6-Фаза — на 32,8% (Р<0,001). К 30 суткам после ваготомии содержание цитохрома Р-450 в микросомах СОЖ также оставалось ниже исходных данных — на 16,7% (Р<0,05), в₅ — на 5,9% (Р>0,05), активность НАДФН —цит.С-ред- на 24,1% (Р<0,01), АГ — на 35,0% (Р<0,001), N-АП — на 17,4% (Р<0,05), Г-6-Фаза — на 25,9% (Р<0,01).

Следовательно, проведенные исследование показатели, что в отмеченные сроки после ваготомии у животных с ульцерогенезом, активность ферментов МОС не только не восстановились до уровня исходных значений, но и имели, особенно после 10 сут наблюдения выраженное снижение с последующей тенденцией к некоторому повышению на 20 и 30 сут. ваготомии. Анализируя полученные данные, следует отметить, что к 30 суткам постваготомического периода исследуемые показатели МОС в СОЖ не достигали статистически значимо до уровня контроля.

Таким образом, проведенные исследования показали, что ваготомия способствует снижению активности ферментов МОС в СОЖ у животных с ульцерогенезом. Среди возможных причин такого явления является влияние ваготомии на активность NO-системы в микросомах СОЖ. Что бы проверить данное предположение, нами в отдельной серии опытов проведены исследования в этом направлении.

На 10-е сутки после ваготомии в микросомах СОЖ содержание метаболитов NO было существенно ниже, чем у животных без ваготомии — на 22,9% (Р<0,01), активность NOS — на 23,7% (Р<0,01), на фоне увеличенной скорости ферментативной активности НАДФН- зависимой — НР, которая превышало данные исхода — на 80,9% и экспрессии ONOO^- - на 23,2% (Р<0,01). К 20-м суткам опыта у животных с ваготомией метаболиты NO все еще были существенно ниже исходных значений — на 18,8% (Р<0,05), активность NOS — на 18,1% (Р<0,05), а скорость реакции НАДФН- зависимой НР и экспрессия ONOO^- повышены — на 31,8 и 21,2% (Р<0,002 и Р<0,01) соответственно. После 30х суток опыта сохраняется тоже тенденция, как и при предыдущем сроке исследовании — содержание метаболитов NO и активность NOS были понижены — на 15,9 и 16,4% (Р<0,05), а скорость реакции НАДФН- зависимой НР и экспрессия ONOO^- - повышены — на 36,0 и 28,0% (Р<0,001 и Р<0,01) соответственно.

Следовательно, ваготомия в исследуемые нами сроки опытов не способствует восстановлению даже до уровня исходных значений NO- системы в микросомах СОЖ, а также до уровня контрольных данных (интактных животных). Такое положение, возможно связано с особенностями активности систем СРО и АОС в микросомальной систем СОЖ у животных после ваготомии.

Проведенные исследования показали, что после ваготомии желудка у животных с ульцерогенезом на 10-е сутки опыта отмечено повышение активности фермента НАДФН — оксидазы, по сравнению с исходными данными — на 18,4% (Р<0,05), к 20 суткам активность этого фермента несколько снизилась по сравнению с предыдущим сроком наблюдения, но все же еще была статистически значимо выше, чем у животных с ульцерогенезом без ваготомии — на 31,5% (Р<0,001). К 30 — м суткам опыта активность НАДФН — оксидазы существенно снизилась по сравнению с 10 и 20—ти суточным наблюдением, но все же оставалось существенно выше, чем в группе сравнения (животные с ульцерогенезом, но без ваготомии) — 18,9% (Р<0,05). Можно полагать, что высокая активность НАДфН- оксидазы была одной из важных причин в экспрессии О₂^- в микросомах СОЖ у животных с ваготомией. Так, после 10 сут. ваготомии содержание О₂^- в микросомах СОЖ превышало таковые значение у животных сравниваемой группы — на 42,8% (Р<0,001), после 20-х сут. — на 58,6% (Р<0,001) и на 30-е сут. — на 36,4% (Р<0,001).

Следовательно, проведенные исследование показали что после ваготомии, сохраняется высокая интенсивность СРО в микросомах СОЖ. Это возможно связано с низкой активностью ферментов АОС. Чтобы проверить данное предположения нами проведены исследования активности ферментов СОД и КТ в микросомах СОЖ после ваготомии у животных с ульцерогенезом.

Анализ полученных результатов опытов показали, что активность СОД в микросомах СОЖ после 10-ти сут. ваготомии у животных с ульцерогенезом была ниже данных в группе сравнения — на 18,9% (Р<0,05), после 20-х на 19,5% (Р<0,05) и 30-х суток — на 16,3% (Р<0,05). Аналогичным образом изменялось активность КТ, которая по сравнению с таковыми данными полученными от животных группы сравнения — были ниже — на 21,1% (Р<0,01), 20,4% (Р<0,02) и 16,6% (Р<0,05) соответственно.

Следовательно, после ваготомии в исследуемых микросомальных фракциях СОЖ активность ферментов АОС — СОД и КТ оказались ниже таковых данных в сравниваемых группах животных, в которых ваготомия не проведена. Можно полагать, что низкая активность АОС по сравнению с контролем была одной из основных причин высокой интенсивности СРО в микросомах СОЖ у животных с ваготомией. Высокая интенсивность СРО как известно является одной из причин повреждения мембран, нарушения функционирования электронзависимых транспортных систем.

Цитохром С является основным электротранспортным белком системы цитохрома Р-450 и дыхательной системы митохондрии[]. Поэтому вполне закономерным представляло возможным изучить уровень его содержания как в микросомах СОЖ, так и крови в динамике после ваготомии у животных с ульцерогенезом.

Важность изучения содержания цит. С в микросомах СОЖ и в сыворотке крови у животных после ваготомии заключается еще и в том, что при повышение его в крови он является одним из многих показателей характеризующих процесс ускоренного апоптоза при патологических состояниях организма. А снижение его в микросомах, является одним из основных показателей характеризующих функциональную активность НАДФН — цитохром С- редуктазы — начального участка электротранспортной системы цитохрома Р-450.

Полученные результаты исследования показали, что уровень цитохрома С в микросомах СОЖ после 10 сут. ваготомии у животных с ульцерогенезом статистически значимо было снижено — на 20,8%(Р<0,01), а после 20 и 30 суток ваготомии — на 17,8 и 15,3%(Р<0,05).

Следовательно ваготомия способствует снижению в микросомальной фракции СОЖ уровня цитохрома С. Несмотря на это, как видно из представленного рисунка наблюдается, с увеличением срока опыта после ваготомии, отчетливая динамика роста этого гемопротеида и к 20 сут. постваготомии содержание его превышает 10 сут. показатель — на 31,6% (Р<0,01), после 30 сут. — на 56,8%, а по сравнению показателя цитохрома С определяемого на 30 сутки с 20 сут. сроком наблюдения — на 19,2% (Р<0,05). Снижение уровня цитохрома С в микросомах СОЖ может быть результатом ускоренной утилизацией, а также выходом его в цитозоль и/или вследствие повреждение мембран — выход цит. С за пределы клетки в общий кровоток.

Как показали наши исследования после 10 сут. ваготомии содержание в крови цитохрома С превышало такового значения оцениваемого у животных группы сравнения — на 35,14% (Р<0,001), после 20 и 30 сут — на 20,4 и 16,9% (Р<0,05) соответственно.

Следовательно, после ваготомии желудка у животных с ульцерогенезом отмечается снижения цитохром С в микросомах СОЖ и наоборот, повышение его в сыворотке крови. Несмотря на выраженное статистически значимую динамику повышения уровня цитохрома С в микросомах СОЖ и его снижение в сыворотке крови к 30 суткам исследуемых гемопротеид все еще существенно был ниже данных в контроле.

Таким образом, проведенные исследования показали, что важными факторами угнетения активности ферментов МОС при ваготомии желудка является: дисбаланс в NO-системе, активация процессов СРО, снижения функциональной активности ферментов АОС, нарушения электротранспортной системы в микросомальных фракций СОЖ.

Чтобы установить связь между исследуемыми системами при ваготомии и резекции нами проведен корреляционный анализ между показателями МОС и отдельными показателями NO-системы, СРО, АОС и содержанием цитохрома С в микросомальной фракции и крови.

В результате анализа корреляционной связи установлено, что после 10, 20 и 30 суток резекции выявлена четкая прямая тесная зависимость между угнетением активности ферментов МОС со снижением в микросомах уровня метаболитов NO, ферментов NOS, СОД, КТ и цитохрома С, и обратная корреляция между экспрессией фермента НР, концентрацией ONOO^-, О₂^- и цит. С в сыворотке крови. Аналогичная тесная корреляционная связь выявлена и у животных на 10, 20 и 30 сутки после ваготомии.

Однако, после резекции корреляционная связь, с увеличением срока наблюдения ослабевает и даже после 30 сут. отсутствует, а у животных с ваготомией она сохраняется на всем протяжении периода наблюдения высокой. По таблицам тяжело оценить динамику корреляционной связи. Для этого мы использовали возможность усреднить полученные данные показателей NO-системы, СРО, АОС и цитохрома С. При этом опирались на рекомендации оценки статистических значений корреляции по В.С. Камышиакову [1998]. Корреляцию считали тесной, если r не ниже 0,9, коэффициент корреляции ниже 0,7 указывает на слабую связь. А корреляция 0,5 и ниже — отсутствие связи. Принимая отсутствие корреляции 0,5 за 100%, условно как отправную точку отчёта можно графически изобразить различие в корреляционной связи между группами с резекцией и ваготомией. Как видно из представленного после резекции показатели МОС максимально коррелировали после 10 суток операции и существенно снижались после 20 суток. А к 30 суткам Σ_ср значения корреляционной связи не отмечено. Тогда как после ваготомии тесная максимальная взаимосвязь показателей МОС с процессами NO-системы, СРО, АОС и цитохромом с в микросомах и крови выявлена на 10-е и 20 сутки исследования и несколько сниженную на 30 сутки опыта.

Из изложенного следует, что функционально — метаболическая активность МОС физиологически взаимосвязано с NO-системой, процессами СРО и АОС, уровнем цит.С и наоборот. Любой сбой в цепи МОС→NO-система, -СРО→АОС и цит.С ведет к патофизиологическим нарушениям на уровне клетки, клеточных мембран, органа и организма в целом.

Таким образом, проведенные исследования показали, что среди возможных причин в возникновений осложнений в желудке после его резекции и ваготомии лежат процессы угнетения активности ферментов МОС и связанные с ней дизметаболические расстройства в NO-системе, систем ПОЛ-АОС, электротранспортной системе цитохрома С микросом желудка, процессы ускоренного апоптоза.

На уровне тканей СОЖ это проявляется дезинтеграцией функциональных взаимосвязей, как следствие развития в ней язвенного процесса, рецидива заболевания. В качестве подтверждения данное предположения, нами проводилось исследование активности ферментов МОС в СОЖ у погибших животных. Следует подчеркнуть, что после резекции желудка смертность наблюдалось через 10 сут. у 5из 15-33,3% животных взятых в опыт, через 20 и 30 суток — у 2 из 10 — 20% и у 1 из10 — 10%. После ваготомии через 10 суток смертность наблюдалось у 4 из 15 животных.

Таким образом, резекция и ваготомия оказывают различной степени позитивное влияние на активность ферментов МОС СОЖ у животных с его язвенным поражением. К 30 сут. после резекции активность МОС в СОЖ восстанавливается до уровня контроля, а после ваготомии остается существенно ниже контрольных значений, но статистически значимо (Р<0,01) выше, чем у животных с язвенным поражением СОЖ.

Активность нитрергической системы МОС в СОЖ при его язвенном поражении после резекции и ваготомии имеет различную направленность, которая зависит от срока послеоперационного периода. В сроки до 10 сут. угнетение активности NOS ассоциируется с гиперэкспрессией NO, ONOO^- и НР, на 20- и 30-е сут. отмечается динамическое повышение активности NOS и снижение NO, ONOO^- и НР. К 30-м суткам после резекции активность нитрергической системы в МОС в СОЖ восстанавливается до уровня контроля, а после ваготомии существенно отличается от контроля, но имеет более выраженные позитивные отличия от показателей животных с язвенным поражением желудка.

Четкая корреляционная зависимость имеется между уровнем в крови цитохрома С и снижением его в тканях желудка и показателями активности ферментов МОС, NO-cистемы у животных с язвенным поражением МОЖ после резекции и ваготомии желудка.

Угнетение активности ферментов МОС, дисбаланс в NO-системе, интенсификация СРО, угнетение активности ферментов АОС, увеличение содержания в крови цитохрома С и его снижение в тканях желудка ассоциируются с увеличением частоты послеоперационных осложнений: увеличением размеров язвенного дефекта, нагноением и расхождением швов, пенетрацией в соседние органы, образованием нагноительного спаечного процесса в соседние органы (сальник, тонкая кишка, печень), высокой гибелью животных, которая составляет у животных после резекции 13,1%, после ваготомии — 28%, что фундаментально подтверждает важность дисметаболических расстройств в МОС в патогенезе постваготомических и пострезекционных расстройств.

Полученные результаты служат фундаментальной основой для объяснения механизмов изменения функционально-метаболической активности ферментов МОС в слизистой оболочке желудка и важности этих нарушений во взаимосвязи со сдвигами NO-системы в формировании пострезекционных и постваготомических расстройств при ульцерогенезе.

Выявленная корреляционная связь концентрации цитохрома С в крови с динамикой активности ферментов МОС, параметрами NO-системы, ПОЛ, АОС в микросомальных фракциях СОЖ при его язвенном поражении указывает на возможность использования этого параметра в качестве дополнительного прогностического критерия оценки степени риска развития осложнений в желудке после резекции и ваготомии.